Determination of Etimicin in Rat Plasma using 9-Fluorenylmethyl Chloroformate Precolumn Derivatization by HPLC with Fluorescence Detection

Um método novo e sensível foi desenvolvido para a determinação de etimicina (ETM) utilizando pré-coluna de derivatização (PCD) com 9-fluorenilmetilcloroformiato (FMOC-Cl) por separação de fase reversa e subsequente detecção por fluorescência. As condições PCD foram todas otimizadas para o menor limite de detecção. A separação cromatográfica foi efetuada em uma coluna Agilent XDB-C8 a 25 C, velocidade de fluxo de 1,0 mL min e fase móvel acetonitrila/água (87:13, v/v). O derivativo etimicina-FMOC-Cl foi monitorado por detecção de fluorescência a λexcitação 265 nm e λemissão 315 nm. Neomicina, um composto de estrutura similar ao ETM foi usado como padrão interno. A avaliação estatística do método foi examinada, mostrando-se preciso e exato com um intervalo de linearidade de 0,038-9,69 μg mL (r > 0,9994). Os estudos de precisão intrae inter-dia mostraram boa reprodutividade com desvio padrão médio (R.S.D.) menor que 5%, e recuperação de 97,80-100,09 % (n = 3). O limite de detecção (LOD) e o limite inferior de quantificação (LLOQ) em plasma foram 0,01 e 0,02 μg mL, respectivamente. Um volume de 50 μL de plasma foi suficiente para detecção de etimicina. O método estabelecido fornece um método bionalítico confiável para a farmacocinética de etimicina em plasma de rato.